大鼠白細(xì)胞介素1β[IL-1β]酶聯(lián)免疫分析試劑盒實(shí)驗(yàn)前處理步驟
1、試驗(yàn)前將試劑和待測樣品放置室溫下平衡[20-25℃]充分混勻。并確定好本次檢測所需的酶標(biāo)板孔數(shù)目，將所需要的微孔放置到配套板架上。
2、按照要求用蒸餾水或純凈水來稀釋濃縮清洗液，充分混勻后備用。
3、將本次實(shí)驗(yàn)所需微孔做好相應(yīng)標(biāo)記，[如有需要做空白對照孔可預(yù)留一孔作為空白對照孔備用]，采用雙孔平行加樣。
大鼠白細(xì)胞介素1β[IL-1β]酶聯(lián)免疫分析試劑盒加樣以及溫育步驟
1、在微孔中將標(biāo)準(zhǔn)品按每孔各[100μl]依次加入一排孔中，并做好相應(yīng)標(biāo)記。
2、將處理后的待測樣品按每孔各[100μl]依次加入，并做好相應(yīng)標(biāo)記。注標(biāo)準(zhǔn)品及樣品不要重復(fù)加入同一微孔中。
3、如預(yù)留了空白對照孔則除去空白對照孔之外在標(biāo)準(zhǔn)品孔及待測樣品孔中分別加入[50μl]酶標(biāo)記物，充分混勻。
[重要說明]：加樣時(shí)盡量將液體加到微孔底部不要觸及孔壁，產(chǎn)生大量的氣泡。這樣會(huì)導(dǎo)致吸光度值的偏差。使用雙孔試驗(yàn)將會(huì)大大減少這一現(xiàn)象的發(fā)生。建議每次檢測均應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
4、將包被微孔板覆膜或加蓋放置在37℃孵育反應(yīng)60分鐘后充分棄盡孔內(nèi)液體并扣干孔內(nèi)剩余殘液，用預(yù)先稀釋好的清洗液反復(fù)沖洗5次[zui后一次沖洗后可使用干凈的吸水紙包裹微孔板倒置于桌面拍打以充分棄盡孔內(nèi)剩余殘液。每次沖洗的間隔時(shí)間為3-5秒即可]。
[重要說明]：洗滌過程非常重要，在沖洗微孔板過程中，務(wù)必反復(fù)清洗干凈，并扣干微孔中的殘余液體，不要使孔內(nèi)液體溢出污染其他實(shí)驗(yàn)孔，否則將導(dǎo)致降低度，造成吸光度偏高的假象并有可能使實(shí)驗(yàn)zui終失敗。
5、如預(yù)留了空白對照孔則應(yīng)包括空白對照孔在內(nèi)，每孔依照次序先加入底物Ⅰ一滴[約50μl]。再加入底物Ⅱ一滴[約50μl]充分混勻。在室溫下避光反應(yīng)15分鐘。6
反應(yīng)過后每孔分別加入終止液[50μl]，充分混勻，終止反應(yīng)。
[重要說明]：加底物Ⅰ/Ⅱ及終止液的過程一定要按照先后順序進(jìn)行，不得顛倒，也不可先將2種底物混合后再加入微孔中，否則將會(huì)導(dǎo)致試驗(yàn)失敗。
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