牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方

實驗方法原理
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用zui廣泛和zui普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)菌生長繁殖所需要的zui基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供作微生物生長繁殖之用。基礎(chǔ)培養(yǎng)基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、 磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCI提供無機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時還要加人一定量瓊脂作凝固劑，瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，實際應(yīng)用時，一般在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。
 
由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌，因此要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長繁殖。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是我司常見代理產(chǎn)品，我司代理BD品牌培養(yǎng)基多年，一直以的質(zhì)量贏得客戶的信賴與支持。本章上海恒遠(yuǎn)將為您具體解析牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方：

牛肉膏：3.0 g
蛋白胨：10.0 g
NaCI：5.0 g
水：1 000 ml
pH：7.4-7.6
 
試劑、試劑盒
牛肉膏蛋白胨NaCI水瓊脂氫氧化鈉鹽酸
儀器、耗材
試管三角瓶燒杯量筒玻璃棒培養(yǎng)基分裝器天平牛角匙高壓蒸氣滅菌鍋pH試紙棉花牛皮紙記號筆麻繩紗布?
實驗步驟
一、稱量 
 
按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放人燒杯中，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒人燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放人水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。

蛋白胨很易吸濕，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再稱取另一藥品。瓶蓋也不要蓋錯。
 
二、溶化

在上述燒杯中先加人少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解，或在磁力攪拌器上加熱溶解（圖1）將藥品*溶解后，補(bǔ)充水到所需的總體積，如果配制固體培養(yǎng)基時，將稱好的瓊脂放人已溶的藥品中，再加熱溶化，zui后補(bǔ)足所損失的水分，在制備用三角瓶盛固體培養(yǎng)基時，一般也可先將一定量的液體培養(yǎng)基分裝于三角瓶中，然后按1.5%-2.0%的量將瓊脂直接分別加人各三角瓶中，不必加熱溶化，而是滅菌和加熱溶化同步進(jìn)行，節(jié)省時間。
 
在瓊脂溶化過程中，應(yīng)控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。配制培養(yǎng)基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進(jìn)入培養(yǎng)基中，影響細(xì)菌生長。
 
三、調(diào)pH 
 
在未調(diào)pH前，先用楂密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加 人1 mol/L NaOH邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH，直至pH達(dá)7.6。反之，用lmol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。
 
對于有些要求pH較的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進(jìn)行（使用方法可參考有關(guān)說明書）。
 
pH不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。配制pH低的瓊脂培養(yǎng)基時，若預(yù)先調(diào)好pH并在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分來滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調(diào)整pH。
 
四、過濾 
 
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利某些實驗結(jié)果的觀察，一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實驗勿需過濾）。

五、分裝 
 
1.  按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝人試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi)。分裝裝置見圖2。
 培養(yǎng)基分裝裝置
A.  漏斗分裝裝置；B. 自動分裝器 
1.  鐵架；2.  漏斗；3.  乳膠管；4.  彈簧夾；5.  玻管；6.  流速調(diào)節(jié)；7.  裝量調(diào)節(jié)；8.  開關(guān)
 
2.  液體分裝

分裝高度以試管髙度的1/4左右為宜。分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定，一般以不超過三角瓶容積的一半為宜，如果是用于振蕩培養(yǎng)用，則根據(jù)通氣量的要求酌情減少；有的液體培養(yǎng)基在滅菌后，要補(bǔ)加一定量的其他無菌成分，如抗生素等，則裝量一定要準(zhǔn)確。
 
3.  固體分裝

分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角燒瓶的量不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
 
4.  半固體分裝

試管一般以試管髙度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。
 
分裝過程中，注意不要使培養(yǎng)甚沾在管（瓶）上，以免沾污棉塞而引起污染。
六、加塞 
 
培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及試管帽等)，以阻止外界微生物進(jìn)人培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能。
 
七、包扎 
 
加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞， 其外再用一道麻繩扎好，用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制曰期（有條件的實驗室，可用市售的鋁箔代替牛皮紙，省去用繩扎，而且效果好。）
八、滅菌 
 
將上述培養(yǎng)基以0.103 MPa，121℃，20 min高壓蒸氣滅菌。
 
九、擱置斜面 
 
將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜（圖3）。
 

十、無菌檢查 
 
將滅菌培養(yǎng)基放人37 ℃的溫室中培養(yǎng)24-48 h，以檢査滅菌是否*。