經(jīng)驗總結(jié)確定ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光值的方法

每個ELISA試驗都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線，所以經(jīng)常有客戶咨詢對于標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光值具體有什么要求，多大范圍比較合？有些人是標(biāo)曲中吸光值范圍在0-1.1072，經(jīng)驗豐富的科研者都建議不要超過1，濃度太大了要稀釋。那么該如何稀釋，稀釋了不就不是標(biāo)曲上的那個濃度值了嗎？

一、依據(jù)郎伯比爾定律，在0.2~0.8吸光度值與濃度具有線性關(guān)系，盡量在這個范圍內(nèi)。

二、在標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作中，選擇不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行試驗，測定其吸光值。直到他們的相關(guān)度不是很好之前都是可以的。相關(guān)度是0.999以上。所以一般情況下，吸光值在1左右能能夠達(dá)到相關(guān)度較好的水平！

三、得看你的待測的樣品的不同濃度的吸光光度值，大致的落在什么范圍（用的標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法是不適合待測樣品，有沒有沉底或者其他的不正常的現(xiàn)象），樣品的濃度需要提前摸索摸索，范圍拉大（如：6.25、12.5、25、50、100、200、400、600、800、1000、2000等）確定好實驗所需要的濃度范圍，就是坐標(biāo)曲線了。的建議就是：做3組平行樣（也包括樣品），這樣線性關(guān)系會更好。

四、稀釋相對而言比較容易。如配1000μg/ml的樣品，可以通過其稀釋成800、600、400.具體的如取1000的濃度4ml加入溶劑（水等）1ml可以得到800μg/ml依次類推。