ELISA試劑盒常見問題解析

                                                       ELISA試劑盒問題解析
    設(shè)計ELISA復(fù)孔檢查時，是對同一個樣品作兩次稀釋，再分別加到板上的兩個孔，還是只稀釋一次，然后吸取兩次分別加到兩個孔？前者似乎把稀釋時的誤差也考慮到了，但做出來的結(jié)果兩個孔相關(guān)挺大的。而較常使用的是哪種稀釋方法？
    為了減小誤差，是先稀釋再加樣。而針對這位客戶所遇到的疑問，我公司技術(shù)人員是這樣解說的：
    1. 前者測的是稀釋和移液的誤差，后者只有移液誤差。
    2. 一般都是稀釋一次，分兩孔吧。同濃度的分復(fù)孔。
    3. 由于是從同一原液稀釋，一般不考慮稀釋誤差(稀釋誤差是存在的)，都是稀釋到想要的倍數(shù)直接分孔(而不是一一稀釋，這樣可以使稀釋誤差減小)。
    4. 復(fù)孔是為了排除移液體積，板的影響，以及其他系統(tǒng)誤差的，要求復(fù)孔的濃度是一致的。稀釋后分孔能滿足此要求，一一稀釋不能。

ELISA操作技巧
    1.操作前應(yīng)對實驗的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度（保持在18 C～25℃）、反應(yīng)孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
    2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯誤，實驗重復(fù)性差。
    3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問污染，導(dǎo)致假陰性或假陽性。
    4.要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn)，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯誤。
    5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過多，以免顯色過強。