磷酸鹽緩沖液的配制方法

磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffered Saline，簡稱PBS）的是常用于生物學(xué)研究的一個(gè)緩沖溶液。PBS可以為三種溶液的英文縮寫，分別是磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffered solution）、磷酸鹽緩沖鹽水（phosphate buffered saline）及 磷酸鹽緩沖鈉（phosphate buffered sodium），其配制方法不同，pH值不同，發(fā)揮的生物學(xué)作用亦不*相同。

磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法：

稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，zui后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2（1034×105Pa）高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4℃冰箱中。需要注意的是，通常所說的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na 離子或K 離子的濃度，Na 離子和K 離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話，則需要在配置的時(shí)候分別加入100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH、定容、滅菌消毒。
 PH            7.6      7.4         7.2        7.0
H2O       1000     1000     1000     1000
NaCl         8.5      8.5        8.5         8.5
Na2HPO4 2.2      2.2       2.2         2.2
NaH2PO4 0.1      0.2       0.3         0.4

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過晝夜的時(shí)間后，PH值會(huì)明顯改變（我親自測過偏酸）。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了，PH值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣，要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問題。每次使用前用試紙測一下過夜了的PBS，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。