ELISA簡介
酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay) ，簡稱ELISA，它是實驗室常用的檢測方法。酶是能夠催化化學反應的特殊蛋白質，其催化效力*人造催化劑，ELISA就是將抗原和抗體的免疫反應和酶的催化反應相結合而建立的一種新技術。使用酶去標記抗原或抗體以后既不影響抗原抗體反應的特異性， 也不改變酶本身的活性。因此ELISA具有準確性高、檢測時間短、價格低廉、判斷結果有客觀標準、結果便于記錄和保存等優(yōu)點，適合于大批標本的檢測，廣泛應用于食品安全檢測、醫(yī)療檢測以及免疫實驗分析等領域。
ELISA基本原理
1.抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，并保持器免疫學活性。例如：蛋白質分子結構上的疏水基團與聚苯乙烯表面的疏水基團能產(chǎn)生互作用而吸附。
2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；
3.酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，由此進行定性或定量分析。
ELISA類別
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體，根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方法，主要類型有雙抗體夾心法、間接法、競爭法、捕獲法等。
雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測抗原常用的方法，先將已知抗體連接在固相載體上，待測抗原與抗體結合后再與酶標二抗結合，形成抗體-待測抗原-酶標二抗的復合物，復合物的形成量與待測抗體原成正比。
競爭法
當小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的抗體結合位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。
雙抗原夾心法
雙抗原夾心法的反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。
間接法
間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體，故稱為間接法。
除了以上常見的4種檢測方法外，還有直接法、捕獲包被法、競爭法（測抗體）、雙抗原夾心法、ABS-ELISA法等其他方法。
ELISA試劑盒樣本收集問題分析
1.樣本的收集液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。固體類標本：植物，土壤，食品，藥品等
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
5. 培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。6. 組織標本
組織標本：切割標本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。對于植物組織，不好勻漿的話，就在液氮中充分研磨
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