細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用量多的就是細(xì)胞培養(yǎng)基，雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)基本技術(shù)大同小異，但是每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠(yuǎn)。若偏離某種細(xì)胞所需的培養(yǎng)條件，則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞表達(dá)不同的表型。
因此，在實(shí)驗(yàn)前，需要熟悉自己所使用的細(xì)胞系，并在實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格遵守所有產(chǎn)品的操作說明。
在實(shí)驗(yàn)過程中，作為實(shí)驗(yàn)小白，我們應(yīng)該如何應(yīng)對相關(guān)問題呢？現(xiàn)在我們一起來看看！
一、如何挑選適合自己細(xì)胞生長的培養(yǎng)基呢？
選擇培養(yǎng)基沒有確切的標(biāo)準(zhǔn)，有幾點(diǎn)建議可供參考：
1.建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首xuan的培養(yǎng)基。可以查閱ATCC或在購買細(xì)胞株時(shí)咨詢供應(yīng)商。
2.根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選RPMI1640。
3.其他實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。
4.也可用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，觀察其生長狀態(tài)，可以用生長曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果選擇*培養(yǎng)基，這是客觀的方法，但比較繁瑣。
二、如何正確地保存培養(yǎng)基？
普通的培養(yǎng)基放置在2-8℃冰箱避光保存，若已開封建議3周內(nèi)使用。未開封的培養(yǎng)基，一般可穩(wěn)定保存1年。
三、培養(yǎng)基中酚紅的作用是什么？導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色變化的原因有哪些？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。
1.培養(yǎng)基顏色變黃，原因有：培養(yǎng)基中細(xì)胞代謝產(chǎn)物為酸性，培養(yǎng)瓶受污染，細(xì)菌代謝產(chǎn)酸等導(dǎo)致。
2.培養(yǎng)基顏色偏暗紅色，原因有：培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性，而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑酚紅會(huì)隨著堿性增加而更偏暗紅。
四、我感覺自己的培養(yǎng)基污染了，這要怎么進(jìn)行測試呢？
取0.1ml液體培養(yǎng)基涂布到無菌蛋白凍niu肉膏培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h，觀察有無雜菌生長（肉眼即可觀察到）。
五、如果我的培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？
一旦培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素，建議避光保存在4℃冰箱且在2周內(nèi)用完。因?yàn)橐恍┛股睾脱宓幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解了。
六、培養(yǎng)基怎么有沉淀了，這是怎么回事？怎么預(yù)防處理沉淀？
1.首先判斷培養(yǎng)基是否已經(jīng)污染，其次，若沉淀為絮狀沉淀則可能是加入血清引起的，此沉淀對細(xì)胞培養(yǎng)無影響。若沉淀為結(jié)晶，有可能是因?yàn)橄蚺囵B(yǎng)基里加入的輔助試劑降低了培養(yǎng)基的溶解度，使一些無機(jī)鹽析出。
2.可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些沉淀，盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
七、那我什么情況下可以使用不加酚紅的培養(yǎng)基呢？
研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素（特別是雌激素）的作用。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基；一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時(shí)，為了避免酚紅干擾檢測，也使用不加酚紅的培養(yǎng)基。
八、為什么培養(yǎng)基中會(huì)含有L-谷氨酰胺和丙酮酸鈉，它們的作用是什么？
L-谷氨酰胺脫掉氨基后可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源。盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是如果沒有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。
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