急!如何尋求讓ELISA系統(tǒng)更穩(wěn)定的方法

   ELISA檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段。可是在新老手操縱過程中老是會泛起或大或小的題目，例如花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空缺還低。

 

   恒遠(yuǎn)生物研究人員一直在尋求讓ELISA試劑盒實驗，ELISA系統(tǒng)更穩(wěn)定的方法。讓我們的客戶實驗更加方便，減少更多操作中遇到的困擾。        

                           
    常用封鎖劑有：0.05%-0.5%的bsa；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。詳細(xì)的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗當(dāng)中去。但*選用什么，要依據(jù)試驗詳細(xì)來實踐。應(yīng)留意以下原理：因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的dna，這種包被方法平均、牢固，已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的ph9.6碳酸鹽緩沖液，還有ph7.2的磷酸鹽緩沖液和ph7-8的tris-hcl緩沖液等等。


   包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到您做出的抗體可不可以被其識別，所以保留抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時因為試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。


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